那就是

质谱检测结果

 

大多数小伙伴拿到Oligo之后，第一时间是看Oligo合成单中的性质，并根据其中的溶解说明，添加buffer或水进行溶解、使用。

 

但是大家都忽略了一个重要的细节，那就是Oligo的质谱检测报告。

 

 

【Oligo为什么要进行质谱检测】

通常情况下Oligo是寡聚核苷酸单链的简称，其涵盖范围非常广，引物、探针、分子信标甚至核酸适配体都属于Oligo的范畴内。顾名思义，Oligo是由多个单核苷酸残基按照5端磷酸3端羟基的顺序拼接而成，单核苷酸之间的磷酸和羟基形成磷酸二酯键，构成了Oligo的骨架结构。

 

目前行业对于Oligo的合成都是采用固相亚磷酰胺三酯法，即在一个固相CPG载体上，进行单核苷酸的一个个拼接合成。这种合成方式主要由“去保护-活化-偶联-封闭”等循环步骤组成，每一个循环能够在Oligo链的5端添加一个新的核苷酸残基，直到合成完所有的核苷酸之后循环结束。

 

虽然该方法具有处理简单、易于自动化等诸多优点，但是每个循环都有一定的成功率（如99.5%），几个循环下来之后，整体的成功率就会很低。因此，经过不同纯化方式处理之后，对产成品进行质量检测就变得尤为重要。

 

【质谱检测的原理及重要性】

作为国内引物合成公司的领导者，生工率先使用质谱对每条引物进行质量控制。我们使用的质谱方法是ESI-MS（电喷雾电离质谱）

 

ESI-MS的简单原理就是使用强电场使Oligo电离产生分子离子，离子按质荷比从小到大逐个被检测器检测记录从而获得质谱图。

以生工生物某Oligo合成订单：AAATggAgTgATTCAgCACAACg为例：

 

 

上图显示了该Oligo经过ESI-MS的原始结果，结果中四个峰分别代表了同一Oligo不同解离程度下的质荷比。

经过公式

分子量M=质荷比*电荷数+解离的H原子

计算之后，这四个峰得到的结果会归一成为该Oligo的分子量，即下图：

 

 

因此，在拿到引物之后，请务必将质谱报告中计算得到的分子量与理论分子量进行对比。

理论分子量=A*313.209+C*289.184+G*329.208+T*304.196-61.964

 

对于这条Oligo，理论分子量为7105.71 g/mole (由生工生物Oligo计算器得到)，与仪器检测值仅相差0.71。由于质谱检测仪器误差存在，在质谱检测分子量与理论分子量相差0.5‰以内，这个Oligo才会认为是合格的。即分子量10000的Oligo，检测值与理论值的误差不能超过5个道尔顿。

 

生工生物承诺，每一条Oligo必须经过质谱检测，只有质谱检测出的分子量满足要求，才会将Oligo出厂送给用户。否则将视为不合格产品，重新合成。

 

生工生物质谱检测车间一角

 

【为什么质谱检测尤为重要】

举个简单的离子，一条Oligo序列为AAATGGAGTGATTCAGCACAACG，分别由生工生物和Q公司采用相同的纯化方式合成，质谱检测对比结果如下：

 

 

同样条件下，生工引物质谱检测纯度要更纯更单一，杜绝了合成过程中的副产物对反应体系的影响，最大程度上保证了客户的正常使用。