自然杀伤细胞（NK）与B细胞和T细胞相同的祖细胞进化而来。来自骨髓的大颗粒淋巴细胞，占白细胞的1-6%。能够靶向和溶解广泛的肿瘤、受感染或受损细胞，而不需要先激活。NK细胞通过颗粒酶/穿孔素发挥其细胞毒性作用，很像CD8+T细胞。它们还通过表达炎症细胞因子（TNF-α和IFN-γ）来刺激适应性免疫。
NK细胞功能--细胞毒性
NK细胞激活机制最初描述的“失踪自我”假说，即NK细胞目标细胞无法表达MHC I，这种机制有助于识别肿瘤细胞和转化细胞。NK细胞通过其表面受体判断激活与抑制信号比。当多个激活受体结合可以覆盖抑制性受体结合MHC I的信号时，触发NK细胞的细胞毒性。
NK细胞功能--协同树突状(DC)细胞
NK细胞作为先天免疫反应中第一道防线，后来被发现表现出与树突状细胞的协同和共激活关系。NK细胞通过诱导其细胞死亡来调节DC群体的细胞死亡。在NK细胞检测到肿瘤或损伤细胞的情况下，后者表达TNF-α 和IFN-γ，刺激附近树突状细胞的激活。激活的树突状细胞作为炎症启动子，表达一系列细胞因子（IL-2、IL-12、IL-18、IL-15，IFN-α & IFN-β），这些因子增强NK细胞的活性、细胞因子分泌和细胞毒性。与此同时，活化的树突状细胞通过招募T细胞来促进抗肿瘤反应。
一、NK细胞信号通路研究
1
磷酸化蛋白检测
HTRF高灵敏磷酸化蛋白检测试剂盒应用经典双抗夹心的检测模型，特异性识别磷酸化位点来检测蛋白磷酸化水平。轻松实现2小时检测磷酸化蛋白。
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细胞因子检测
标记了荧光供体Eu或Tb的抗体和标记了荧光受体的XL665或d2的抗体，结合细胞因子，使用320nm或340nm光激发供体产生荧光共振能量转移（FRET，信号620nm），受体发生665nm荧光信号。细胞因子检测模型：双抗夹心。操作简单，检测时间短，可以利用该特点实现“多因子检测”。
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杀伤功能检测
(1)
生物标志物（颗粒酶&穿孔素）
颗粒酶 B存在于细胞毒性淋巴细胞、NK（自然杀伤）细胞和细胞毒性T细胞中。与穿孔素共分泌，穿孔素在细胞膜上形成孔，进入靶细胞的细胞质并通过半胱天冬酶活化触发细胞凋亡。检测原理利用标记了镧系元素Eu的荧光供体的抗体和荧光受体d2的抗体特异性识别分泌的Granzyme B，采用双抗夹心的检测模型定量Granzyme B。快速检测细胞上清液和全细胞中的人颗粒酶B。无需任何洗涤步骤即可实现高通量，替代ELISA。原理如下图，穿孔素的检测原理亦是。
(2)
DELFIA EuTDA终点法
靶细胞与BATDA共孵育，BATDA进入细胞后，被内酯酶裂解形成TDA，亲水性的TDA不能再穿过细胞膜屏障。与效应细胞共孵育，启动杀伤效应将靶细胞中的TDA释放到上清液中，然后将其转移到检测板上，并化合物溶液结合生成荧光分子EuTDA。细胞裂解导致EuTDA的增加，因此信号的增加与标记的靶细胞群的细胞死亡相关。
BATDA法与51Cr 释放法的平行性最好，作用时间明显缩短，可重复性高，对悬浮靶细胞和贴壁型靶细胞均具有很好的适用性。可重复性好，可以满足免疫细胞体外杀伤效力检测的需要。
来源于优宁维药物研发官网
