由于融合蛋白的分子较大,结构复杂,往往给蛋白结构表征分析带来较大的挑战。而GlySERIAS可消化富含甘氨酸的融合蛋白连接子,如GIy4Ser和Glyx Sery (GS)和聚甘氨酸(G)连接子。该酶能够分离多功能融合蛋白的单个结构域,以促进其结构表征。融合蛋白的中级分析既可以降低总体样本的复杂性,也可以允许域特异性的识别和翻译后修饰的监测。
特点
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特异的酶消化融合蛋白中的柔性连接子
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对GS连接子,包括G4S和GxSy连接子,以及聚甘氨酸(G)连接子均有活性
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1小时反应(可能需要对单个蛋白质进行优化)
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对连接子区域内多个位点可重复消化
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不需要还原剂或辅助因子

图1. GlySERIAS工作原理图
案例
融合蛋白度拉糖肽由两个胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)分子组成,通过柔性GS连接子连接到人类IgG4的Fc区域。为了分别研究多肽和Fc区,从而能够识别特定的PTMs(翻译后修饰),使用GlySERIAS消化度拉糖肽。通过反相LC-MS分析样品表明,使用GlySERIAS消化连接子后,多肽完全从Fc区去除。此外,还发现GLP-1肽上存在氧化修饰。尽管GlySERIAS在几个位点同时进行消化,但经过三次重复试验显示,消化后获得的不同Fc/2变体的相对数量是可重复的。

图2. GlySERIAS消化度拉糖肽
来源于优宁维药物研发官网