CAR-T细胞治疗多发性骨髓瘤（MM）目前呈现指的期待的效果，但通常有严重的毒性。CAR-NK细胞在重新定向对抗耐药骨髓瘤细胞时可能发挥更小的毒性。

NKG2D通过靶向多达8种应激配体（NKG2DL）来识别并杀死受感染的细胞和癌细胞，即MICA、MICB和ULBP，这些配体在病毒感染、DNA损伤或转化的细胞上过表达，通常在健康组织中不表达。超过70%的人类癌症会上调NKG2D配体的表达。

文中NKAE为实验室大量活化和扩增的自体NK细胞，临床效果良好，无毒性反应。还比较了CAR-NKAE细胞与记忆性CAR-T细胞的体外疗效。

作者首先使用慢病毒转染的方式生产CAR，慢病毒载体（NKG2D-CAR：LV）在293 T细胞中通过连续稀释转导滴定，通过流式细胞术分析MM细胞中的NKG2D配体表达。随后从样本中分离PBMC进行NK和T细胞的分选。两种细胞类型NKG2D阳性细胞的百分比高于未转导细胞，中位荧光强度（MFI）增加。6天后，表达CAR的NKAE细胞的表达保持稳定，T细胞的转导更稳定。

采用EuTDA法（PerkinElmer，AD0116）评估细胞毒性。NKG2D-CAR-NKAE细胞可根除MM细胞。以U-266、L-363、OPM-2骨髓瘤细胞和原代MM浆细胞作为靶细胞，与效应细胞按指定的靶细胞（E：T）比例孵育4小时。为检测CAR转导的效应细胞的安全性，以供体PBMC、CCD-18Co和NL-20细胞系为靶点，进行细胞毒性试验。NKAE细胞对U-266 MM细胞系表现出强大的细胞毒性活性，在最大E：T比值（32：1）时，破坏了77.7%的MM细胞。与未转导的NKAE细胞相比，CAR-NKAE细胞表现出更好的细胞毒性，在较低的E：T比值（8：1）下破坏了100%的MM细胞。与未转导的NKAE细胞、记忆T细胞和CAR-T细胞相比，CARNKAE细胞对MM细胞系表现出更强的细胞毒性。

作者使用流式细胞术检测细胞因子释放，效应细胞和靶细胞以16：1的比例孵育4小时。NKAE细胞和T细胞分泌了所有所分析的细胞因子。T细胞的细胞毒性机制普遍上调，细胞因子、溶解颗粒和可溶性Fas/FasL的释放增加。与NK细胞相比，细胞凋亡配体在NKAE细胞和CAR-NKAE中TRAIL表达增加，FasL表达减少。

除此之外，NKG2D-CAR-NKAE细胞在体内显示出强大的疗效。接受NKAE细胞和CAR-NKAE细胞的小鼠存活时间是对照组（MM组）小鼠的两倍。接受记忆T细胞或CAR-T细胞的小鼠存活时间与未处理组相同，CAR-T细胞的小鼠只存活了20天。

NKG2D-CAR转导在体外增强了强大的抗肿瘤活性。虽然记忆T细胞也易受CAR转导的影响，但它们在自体环境中对MM无效。相比之下，自体CAR-NKAE细胞显示出强大的细胞毒性活性，没有毒性，并且在小鼠模型中完全消除了MM的生长。本研究使用携带NKG2D-CAR的自体NKAE细胞治疗，为多发性骨髓瘤治疗提供了重现性和可行性。

文章来源：Blood Cancer Journal (2021) 11:146 ;

https://doi.org/10.1038/s41408-021-00537-w

中检院曾发文题为《免疫细胞治疗制剂体外杀伤效力评价》，文中对⁵¹Cr 、BATDA 、CAM 、CytoTox-Glo 、PKH、EliSpot和LDH法进行了杀伤效果评价。其中⁵¹Cr同位素法是检测杀伤的金标准，结果总结，BATDA法与⁵¹Cr 释放法的平行性最好，作用时间明显缩短，可重复性高，对悬浮靶细胞和贴壁型靶细胞均具有很好的适用性。可重复性好，可以满足免疫细胞体外杀伤效力检测的需要。