背景质检：首先我们来回顾一下荧光染料的染色原理，AO/PI染色原理：吖啶橙（AO）是一种小分子染料，可以通过完整的细胞膜，嵌入所有细胞（活细胞和死细胞）的细胞核，呈现绿色荧光；碘化丙啶（PI）只能通过不完整的细胞膜，即死细胞的细胞膜，嵌入所有死细胞的细胞核，呈现红色荧光，通过标记出的绿色荧光和红色荧光就可以辨别出活细胞和死细胞，这种特异性染色的方法也可以排除无核细胞、杂质、碎片等的干扰。

荧光细胞计数仪是用来确定单细胞核悬液的浓度与活性、细胞核悬液的背景质量以及细胞核的大小

我们也来一起回顾一下台盼蓝计数染色原理：台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高，可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。

那么怎样通过血球计数板进行单细胞核悬液计数呢？

1. 将血球计数板擦拭干净，取干净的盖玻片盖在计数板上；

2. 将细胞核悬液混匀（或10 μl台盼蓝+10 μl细胞核悬液），吸出10 μl核悬液至计数板上盖玻片的一侧使细胞核悬液铺满盖玻片和计数板之间；

3. 在显微镜下分别对V1/V2/V3/V4四个计数区域进行计数；

4. 按细胞计数公式进行计算，计算公式：细胞核总数= {(V1+V2+V3+V4 )/4}*10000 *核悬液体积*稀释倍数，V1/V2/V3/V4为各个计数区的细胞核数目，细胞活率=活细胞数目/总细胞数目*100%。

5. 高倍镜下核质量判断:

A：高质量核具有完整的边缘轮廓，可进行后续实验。

B：细胞核完整，有少量起泡迹象。仍然可进行后续实验。

C：细胞核边缘有多处破损迹象的核。有一定的实验风险。

D：细胞核不再完整，不要继续实验。