MicroRNA (miRNA) 是一类由内源基因编码的长度约为19~25 nt的非编码单链RNA分子,它们在动植物中参与转录后基因表达调控，因此，其在肿瘤发生发展、器官形成、病毒防御、表达调控及代谢等方面发挥着非常重要的作用。简单来说，miRNA就是一条不会翻译蛋白的小RNA。nt指核苷酸，bp是碱基对，miRNA是单链故用nt作为单位。
在细胞核中RNA聚合酶Ⅱ或Ⅲ将miRNA基因转录为初级转录产物pri-miRNA（长度大约为300~1000个碱基）。
pri-miRNA在细胞核中经Drosha/DGCR8复合物催化生成pre-miRNA（长度约为70~90个碱基）。
pre-miRNA在转运蛋白Exportin-5的作用下由细胞核转运到细胞质中。
pre-miRNA在细胞质中由Dicer/TRBP复合物切割开始产生成熟的miRNA，长约19~25nt。
接着由另一种RNaseIII-Dicer 酶进一步切割产生长约19~25nt的成熟miRNA。成熟的miRNA与其他蛋白质一起组成RISC（RNA-induced silencing complex）复合体，从而引起靶mRNA降解或者翻译抑制。成熟的miRNA可以产生于发夹的5'臂和3'臂，但后者频率高于前者，根据其产生来源会将miRNA命名为“-5p”和“-3p” 来进行区分。如hsa-miR-21-5p和hsa-miR-21-3p，分别表明从hsa-mir-21前体的5’端臂和3’端臂加工而来。根据其表达水平不同也会进行标记区分，表达较高的miRNA后面不加任何符号，而表达水平较低的miRNA后面加上*号，如hsa-miR-21*,有时带“*”的miRNA就根本不出现。
在查找miRNA成熟体序列的时候，通常我们建议通过专门数据库miRBase数据库查找，数据收集会比较全，但是最近小伙伴们发现miRBase数据库总是很难打开，等不起的小伙伴不要担心，也可以转战其他数据库。
下面就给大家介绍下平时我们非常熟悉的NCBI数据库是如何查找miRNA序列的。
以查找小鼠 microRNA 122-5p序列为例
打开NCBI 选择Gene选项
搜索框里面输入我们要查找的基因名称，miR122 一般后面的-3p或者-5p先不放，点击搜索。
我们看到结果如下，找到我们需要的物种，点击对应物种的基因名称。
打开页面如下，然后我们再点击到参考序列这里，或者往下拖到序列也是可以的（这些是不是都非常熟悉，和我们查找mRNA序列其实是一样的）。
我们看到RNA序列这里，然后点击对应的NR号。
打开界面如下，红色为物种名称 绿色是我们查找的基因名称。
这个时候细心的小伙伴就会发现我们找到的并不是成熟的microRNA序列了，因为碱基序列有70nt左右 ，其实页面里面有描述，这个是一个microRNA的前体序列，那么关键来了，我们怎么找到我们需要的成熟体序列呢？
再往下拉，我们可以看到ncRNA字样，点击它页面如下。
这个时候我们就可以看到我们需要的序列已经被圈出来了，包括基因序列，还有详细的描述，复制这个序列我们就可以开始设计成熟miRNA的qPCR引物啦。
今天的技术分享就到这里啦，小伙伴们学会了吗？快快分享一起学习吧！
.png)
