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发布日期:2025/7/7 21:35:00

蛋白翻译后修饰 (PTM) 是指蛋白质合成后发生的化学修饰,这些修饰可以改变蛋白质的结构、功能和定位,在细胞信号传导、代谢和疾病发生发展中发挥重要作用。瑞典Navinci公司研发的临近链接技术(Proximity Ligation Assay, PLA)为研究PTMs提供了一种高灵敏度和高特异性的方法。

 

蛋白翻译后修饰 (PTMs)

蛋白质是细胞功能的主要执行者,而蛋白翻译后修饰通过在蛋白质上添加或移除特定化学基团,精细地调控蛋白质的活性、定位、稳定性及与其他分子的相互作用。常见的 PTM 包括:

 

  •  磷酸化: 磷酸基团的添加,通常由蛋白激酶催化,可以改变蛋白质的活性、定位和与其他蛋白质的相互作用。

  • 糖基化: 糖基的添加,可以影响蛋白质的稳定性、溶解度和与其他蛋白质的相互作用。

  •  泛素化: 泛素蛋白的添加,可以标记蛋白质进行降解。

  • 乙酰化: 乙酰基的添加,可以影响蛋白质的活性、稳定性和与其他蛋白质的相互作用。

 

PTMs在细胞信号传导、代谢、细胞周期调控、免疫反应和疾病发生发展中发挥着重要作用。例如,磷酸化可以调节酶的活性,糖基化可以影响蛋白质的稳定性和定位,泛素化可以标记蛋白质进行降解。PTMs 异常与疾病相关,以癌症为例,一些癌基因的过度磷酸化会导致细胞生长失控,而一些抑癌基因的过度泛素化会导致其降解,从而促进肿瘤生长。

 

临近连接技术 (PLA)

Schematic PTM discovery timeline for 10 major PTMs

 

临近连接技术 (PLA)

PLA技术由瑞典NAvinci技术公司开发,其核心原理基于临近效应引发的信号放大(Söderberg,O.et al. (2006).Direct observation of individual endogenous protein complexes in situ by proximity ligation. Nature Methods, 3(12), 995 - 1000.)

PLA 实验流程:该技术使用两对抗体,每对抗体分别连接一段独特的寡核苷酸序列。当这两对抗体特异性地结合到目标蛋白复合物上彼此靠近(通常距离在40nm内)时,连接在抗体上的寡核苷酸序列也随之靠近。此时,通过DNA连接酶将相邻的寡核苷酸连接起来,形成一个完整的可扩增的DNA环。随后,利用滚环扩增技术(rolling circle amplification, RCA)对DNA环进行大量扩增,产生一条长链的单链DNA,其上包含多个重复的序列单元。最后,通过荧光标记的互补寡核苷酸探针与扩增后的DNA链杂交,借助荧光显微镜或其他荧光检测设备即可检测到荧光信号,荧光信号的强度与目标蛋白复合物的数量成正比,从而实现对目标蛋白复合物的定性和定量检测。

PLA 技术检测PTMs 应用案例

  •  磷酸化HER2 检测

 

 磷酸化EGFR 检测

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