一种用于准确定量病毒基因组和确定脂质纳米颗粒封装效率的新技术
Promega最新发布的TruTiter™ Reagent System无需DNase处理步骤,即可通过评估AAV衣壳完整性,实现基于dPCR或qPCR的病毒基因组的一致定量。
关键词:腺相关病毒(AAV)、病毒基因组定量、病毒滴度测定、qPCR、dPCR、ddPCR。
快速了解本篇文章介绍重点。
1.内容概要
Promega最新开发的AAV病毒基因组定量分析新工具:
• TruTiter™试剂相比DNase,是确定AAV基因组滴度的一致性测定的可靠替代品。
• TruTiter™试剂还可以通过测量被保护的遗传载荷来确定LNP封装效率。
2.基本介绍
腺相关病毒(Adeno-associated virus, AAV)载体作为基因治疗的递送系统展现了巨大的潜力。然而,建立可靠的定量分析、感染活性检测及剂量确定方法仍存在挑战。脂质纳米颗粒(Lipid nanoparticles, LNP)作为递送系统同样获得成功应用,COVID-19疫苗的研发成果已充分证明其有效性。对于LNP的表征方法,确定封装效率仍是亟待解决的技术难点。
TruTiter™试剂是一种小分子,它被排除在具有完整蛋白质衣壳的病毒、活细胞或具有完整膜的脂质纳米颗粒(LNPs)等包封或区室化的大分子结构之外。然而,该分子可以共价结合暴露的核酸并阻止其随后通过PCR扩增。这一特性使得可以选择性地扩增完全包封的核酸,从而准确测量完整的AAV和LNP基因组滴度。
上图. TruTiter™试剂对受损AAV的PCR扩增抑制作用。