技术分享丨纳米孔测序又翻车?真相竟是…样本质量在搞事情!
嘿,科研er们!生工生物的KBSeq三代纳米孔测序明明能4小时出结果、99.9%准到尖叫,但为啥你的实验还在“卡Bug”?答案就藏在样本里!今天带你扒一扒测序失败的元凶,手把手教你自检避坑秘籍,从此告别重复劳动,效率狂飙!
1. 浓度不够,信号全跑路
浓度<10 ng/μL?纳米孔:“我饿到眼花,抓不住DNA啊!”
2. 总量太少,测到一半就躺平
总量<200 ng或体积<20 μL?机器:“样本呢?我还没开始就结束了?!”
3. 纯度拉垮,数据变“渣男”
OD₂₆₀/₂₈₀不在1.8-2.0?污染物:“嘻嘻,我负责让结果崩盘!”
Step 1:浓度&体积,拿捏住!
用分光光度计or Qubit测浓度,>10 ng/μL是底线!
算总量:浓度×体积≥200 ng(比如15 ng/μL × 20 μL=300 ng,稳了!)
Step 2:纯度检测,拒绝“脏东西”
OD₂₆₀/₂₈₀比值1.8-2.0才是纯DNA!
<1.8?蛋白质在捣乱!>2.0?盐离子or有机物在蹦迪!快用纯化试剂盒“大扫除”!
Step 3:完整性检查,拒绝“断片DNA”
跑个琼脂糖电泳,主带清晰无拖尾=DNA完好无损!
PCR产物送测?先确认没杂带!否则纳米孔:“这锅我不背!
免费预检服务:纠结样本行不行?
戳技术小哥:
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