做 ELISA 时，你有没有过这种崩溃瞬间：明明离心了样本，结果却跑出假阳性 —— 阴性对照孔突然“诈户”(出现异常信号)；或者假阴性—— 阳性样本信号低得像没加样？别光骂试剂盒不靠谱，显微镜下看看你的样本：那些没被离心干净的细胞碎片、飘着的微颗粒，正偷偷给你 “改答案” 呢！
细胞碎片就像没清理干净的 “玻璃渣”，看似不起眼，却能硬生生拆散抗原抗体的 “姻缘”。当离心转速低于 1500rpm 时，直径大于 5μm 的细胞碎片（比如破碎的细胞膜、细胞核残片）根本沉不下去，它们会带着大量杂蛋白 “黏” 在酶标板上。这些碎片上的非特异性位点，会像 “第三者” 一样抢占抗体的结合位 —— 比如细胞碎片里的黏附蛋白，能和一抗的 Fc 段瞎勾搭，就算样本里没有靶抗原，酶标仪也会读出 “阳性” 信号。
更坑的是，碎片多的时候会抱团形成沉淀，加样时一不小心吸进去，孔里就像撒了把沙子，洗板都洗不干净，直接导致假阳性。
举个栗子：处理巨噬细胞上清时，1000rpm 离心5分钟看似省事，但显微镜下能看到大量细胞碎片在晃悠。这些碎片里的溶酶体酶还会破坏抗体结构，让真阳性样本的信号被 “稀释”，出现假阴性。
比细胞碎片小的微颗粒（直径 0.1-5μm）更狡猾，它们像 “隐形的海绵”，悄咪咪吸附抗原或抗体，让检测结果跑偏。比如血清里的脂蛋白微球、细胞分泌的外泌体，离心转速不够时，这些小家伙会留在样本里兴风作浪。当转速低于 3000rpm，脂蛋白微球会像 “油滴” 一样包裹抗原，让一抗找不到靶标，信号变弱（假阴性）；而当转速过高（超过 12000rpm），外泌体这种带靶抗原的微颗粒会被压进沉淀，本来该阳性的样本直接 “哑火”。更麻烦的是，微颗粒表面的电荷会吸附酶标二抗，就算没抗原，也会让底物显色（假阳性）。做肿瘤标志物检测的小伙伴肯定遇过：同一份血浆，3000rpm离心的信号比1500rpm 高30%—— 不是抗原变多了，是 1500rpm没清干净的微颗粒抢了抗体，拖低了信号。
离心就像给样本 “过筛子”，转速不同，筛出来的 “杂质” 天差地别：
低速档（800-1500rpm）：只能沉下大细胞和大块组织碎片，细胞小碎片、微颗粒全留下 —— 适合尿液、脑脊液这种本身碎片少的样本，但用来处理细胞上清就是 “灾难”，大概率假阳性。
中速档：（能清掉 80% 的细胞碎片（直径＞2μm）和部分大微颗粒（如脂蛋白聚集体），血清、血浆这类样本用这个档位最保险，既能除杂又不损伤靶蛋白。
高速档：（连 0.5μm 的微颗粒（如外泌体、小碎片）都能沉下去，但要小心：转速超 6000rpm 时，部分靶蛋白（比如分子量小的细胞因子）可能跟着沉淀跑，导致假阴性。
避开假阳 / 假阴的“离心操作指南”
01
按样本“性格”选转速
细胞上清：2500rpm 离心 10 分钟 —— 刚好沉掉死细胞碎片，留住游离的靶蛋白。
组织匀浆：先用 3000rpm 甩 5 分钟（去大块碎片），再用 6000rpm 甩 10 分钟（清微颗粒），两步走更稳妥。
血清 / 血浆：3500rpm 离心 15 分钟 —— 对付纤维蛋白微凝块效果一绝，别心疼时间，不然假阳性能让你返工到崩溃。
02
盯紧离心后的“三层结构”
合格的离心样本应该是 “上清清亮 + 中间无云雾层 + 底部沉淀紧实”。如果中间飘着一层灰蒙蒙的东西（多是脂质微颗粒和小碎片），必须补一次 4000rpm 离心 5 分钟，不然这些 “漏网之鱼” 会让你的标准曲线歪到姥姥家。
03
拒绝 “一刀切” 转速
别信 “所有样本都用 4000rpm” 的谣言！比如检测外泌体里的抗原时，转速超过 5000rpm 会把外泌体沉淀掉，信号直接归零（典型假阴性）；而检测细胞裂解液里的大分子蛋白，转速太低留着碎片，会导致抗体非特异性结合（假阳性）。
04
离心管里的“吸样禁忌”
吸上清时别贪多，离底部沉淀至少留1mm距离 —— 那里藏着最顽固的碎片和微颗粒。用移液枪时慢一点，别让液体搅动沉淀，不然等于白离心。
其实，ELISA 的假阳性和假阴性，很多时候是 “离心没到位” 埋下的雷。那些肉眼看不见的细胞碎片和微颗粒，就像实验里的 “隐形刺客”，转速不够时它们兴风作浪，转速太猛又会误伤靶蛋白。而一款给力的 ELISA 试剂盒，能在离心到位的基础上，进一步为实验结果保驾护航
睿信生物助力科研
睿信ELISA试剂盒，凭借高特异性的抗体，能减少微颗粒带来的非特异性结合，即使样本中存在少量残留杂质，也能精准捕捉靶抗原，让信号更稳定；同时其良好的灵敏度，能在靶蛋白因离心稍受影响时，依然保持稳定的检测效果，让科研人员在严谨操作的同时，更省心地获得可靠数据。下次做实验前，花 1 分钟想想样本里可能藏着哪些 “捣蛋鬼”，选对转速再搭配合适的试剂盒，结果才能靠谱到让你拍大腿。
