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Spectrum day
PowerPlex® 35GY
8色试剂盒
介绍
新Spectrum CE System建立在传统的5色和6色毛细管电泳分离基础上，扩展到8色荧光通道。Promega 的PowerPlex® 35GY System 使用这八个颜色通道中的七个, 用以检测35个基因座，包括CODIS 20个核心基因座、3个信息量高的常染色体基因座、用于性别确认的 Amelogenin 和DYS391、10个Y-STR基因座用于协助法医案件中性侵案件中证据搜集或家系排查。每个扩增反应中还包括两个内部质控因子（QIS和QIL），以确定样品是否被降解或抑制。加上额外两种的检测染料，总共有15个小于250bp的常染色体STR基因座，更有利于分析疑难样本。
本文将展示PowerPlex® 35GY System在Spectrum CE System上的性能数据，包括与美国家标准与技术研究所（NIST）合作进行的一致性测试的研究结果。结果表明PowerPlex® 35GY 8色试剂盒对于法医工作流程具有显著的优势。
基因座配置
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扩增提取的DNA
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上图为PowerPlex® 35GY 8C System 和 18E 扩增1ng阳性对照2800M；29个循环扩增。扩增样品应用Spectrum CE System毛细管电泳仪检测（2kV 15s (进样) ），并使用GeneMarker® HID软件分析。
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上图为PowerPlex® 35GY 8C System 和 18E 进行口腔样本卡直接扩增。在12.5μl 进行25个循环扩增。扩增样品应用Spectrum CE System 毛细管电泳仪检测，并使用GeneMarker® HID软件分析。
一致性测试
NIST为试剂盒做了一致性检测。将PowerPlex® 35GY的扩增结果与NIST最终数据库进行了比较。在比较的38,999个等位基因中，观察到10个不一致的等位基因命名，最终一致率达到99.97%。
•在DYS635位置检测到一个无效等位基因
•在D7S820位置检测到一个不一致的等位基因
•在CSF1PO位置检测到一个不一致的等位基因
•在SE33位置检测到7个不一致的等位基因，包括SRM 2391d 中的Component B——由TTTT或TTG缺失引起
四个碱基的缺失形成一个无效的重复，然而，35GY的基因型和基因测序结果完全一致，表示并未受到影响。
稳定性评估
上图为应用推荐方法扩增提取的DNA，进样为29个循环，模板为1 ng。将扩增产物添加到毛细管电泳板的3个孔中。应用Spectrum CE 毛细管电泳仪，立即(0小时)进样第1孔，24小时后进样第2孔，48小时后进样第3孔。进样条件均为2KV和15秒，运行电压为13KV；用GeneMarker® HID软件进行分析。从上图中可以看到，即使在仪器抽屉中放置超过48小时，信号仍未丢失。
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