依赖解旋酶的恒温基因扩增技术（HDA）是2004年报道的一种恒温扩增技术，同传统PCR一样，它是利用两条引物进行扩增得到目的片段，但不同的是，HDA利用了解旋酶解开DNA单链，不需要通过高温变性的步骤，从而达到引物与目标片段相结合的目的。这一特性使得其能在恒温条件下就能进行PCR，不需要昂贵的仪器：同时该技术操作简便，对实验人员要求不高，可以适合在基层实验室推广。
要进行HDA，需要以下三种蛋白协同作用：
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解旋酶（例如E. coli UvrD解旋酶、Tte.UvrD解旋酶）：解开DNA双链
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SSB蛋白（例如T4基因32蛋白、RB49基因32蛋白）:与模板单链结合，使模板单链处于单链状态并保护其完整性
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DNA聚合酶（例如Bst DNA聚合酶、Klenow Fragment(3-5 exo-)聚合酶、Taq DNA聚合酶、Gst DNA聚合酶。）：负责DNA的合成
1、解旋酶与DNA链结合，打开DNA双链
2、SSB（单链DNA结合蛋白）与模板单链结合，使模板单链处于单链状态
3、引物与模板杂交，然后在DNA聚合酶催化下扩增，新合成的双链DNA即产物作为底物进入下一轮扩增。
4、新生成的dsDNA作为产物进入到下一轮扩增
DOI: 10.1039/c3mb70304e
该产物最终可以通过很多方法进行检测，例如荧光定量仪、琼脂糖凝胶电泳、免疫试纸条等。
HDA产物检测方法
HDA能够很好地扩增和检测微生物基因组DNA，质粒和cDNA等，作为一种新的核酸等温扩增方法，从敏感性、准确性和可操作性方面，其有很大的发展前景，下面通过几篇文章来介绍其应用。
采用以CaM35S、Nos、cP4-EPSPS 3种外源基因和内源基因Lectin(大豆凝集素基因)为目的片段设计4对特异引物，建立反应体系，通过HDA方法对内源基因和3种外源基因的检测特异性和灵敏度进行实验，并对结果进行同源性分析。最终建立了转基因大豆HDA检测法，检测特异性良好，3种外源基因的检出限为0.2％。
HDA法检测大豆不同外源基因的检出限为0.2％。
以单核细胞增生李斯特氏菌（Lm）的基因为目的片段设计特异性引物，建立了可在65℃恒温扩增快速(90 min)检测Lm的HDA检测方法，通过优化条件，最低检测限为7.8E+3 cfu/mL，灵敏度与普通PCR的检测相当，Lm的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点，并且对仪器要求更低，具有良好的应用前景。
特异性试验电泳结果显示，2株Lm都呈阳性，于大约105 bp处可见明显的DNA扩增带，其余无关菌株均呈阴性。
上图为HDA方法检测不同梯度Lm ATCC 7644的DNA电泳图；下图为普通PCR方法检测不同梯度Lm ATCC 7644的DNA电泳图
选取医院收治的手足口病儿童（EV71、CA16及HFMD其他EV病原体40例）标本，使用依赖解旋酶的等温扩增技术检测，结果发现阳性检测结果符合率为91.28%~100%，平均为95.24%，阴性检测结果符合率为100%。
HDA 作为一种崭新的恒温基因扩增方法,目前仅处于初期阶段,还没有广泛用于基因扩增,但该方法具有很大的发展前景，只要深入探索,完全可以作为诊断工具,为临床诊断作出巨大的贡献。
1、赖解旋酶恒温基因扩增技术的研究进展
2、Helicase-Dependent Amplification of Nucleic Acids
3、依赖解旋酶的等温扩增技术在手足口病检测中的应用研究
4、Isothermal amplified detection of DNA and RNA
5、应用依赖解旋酶DNA扩增技术检测转基因大豆
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