Arrestin是一种蛋白质小家族，调节G蛋白偶联受体的信号转导。β-Arrestin在多种生理和病理过程中起着重要作用，包括脱敏、内化和隔离以及G蛋白偶联受体囊泡（GPCR）的转运。

β-arrestin 1和 β-arrestin 2是细胞内蛋白，参与调控GPCR内吞和信号转导。β-arrestin调控的GPCR内化：（1）偏置配体打开GPCR的内部片段，使其磷酸化；（2）β-arrestin被招募来代替G蛋白；(3) β-arrestin recruit AP2（适配器复合物），作为网格蛋白连接到GPCR；（4）网格蛋白和dynamin网络覆盖并定义了GPCR周围的内化区域；（5）GPCR被内化，内化复合体解体。

图1：β-arrestin信号通路

β-arrestin recruitment KIT用于监测 β-arrestin 2和AP2之间的细胞相互作用。用于表达双方和过表达GPCR的细胞中。兼容所有类型的GPCRs和所有类型的GPCR/β-arrestin相互作用。

基于HTRF®技术，用Eu标记的AP2抗体（Eu供体）和d2标记的β-arrestin2抗体（受体）检测细胞表达的天然β-arrestin2和AP2的相互作用。当染料接近时，用光源（激光或闪光灯）激发供体，触发荧光共振能量转移（FRET），进而在特定波长（665nm）发出荧光。该特异性信号与 β-arrestin 2的招募成正比。

图2：HTRF工作原理示意图

100μl细胞铺板后去培养基，加入compands 100μl盖上封板膜室温共孵育，后加入30μl Stabilization buffer 1加盖封板膜室温孵育15分钟，随后弃buffer使用100μl wash buffer洗3次，弃buffer，加入Eu和d2抗体各50μl孵育过夜，酶标仪读值。

如上述操作所得信号窗口可满足需求，下图黑色框中步骤可省略。

图3：操作流程示意图

该试剂盒使用已知激动剂进行验证，其结果与各种完整和部分激动剂化合物的药理排名一致，同相关文献报道一致。

图4：已报道化合物验证结果展示

Tips：本试剂盒适用于贴壁细胞，如内源表达β-arr2的HEK293、过表达β-arr2的CHO-K1均可适用。

来源于优宁维药物研发官网