AAV被用作基因传递的载体，主要是因为它们能够感染无致病性的细胞，而且易于工程和生产。

常规AAV定量使用传统ELISA方法来检测，今天小编介绍两种不需要洗板的“ELISA”技术定量AAV的实验方法。

HTRF®检测AAV，方法简单、无需洗板，快速地定量细胞裂解液和上清液中的腺相关病毒不同血清型颗粒（以病毒颗粒/mL或VP/mL表达），提供了ELISA的快速替代品。提供AAV1，AAV2，AAV3B及AAV6不同血清型检测。以AAV1为例：

该试剂盒的检测原理是基于HTRF®技术（均相时间分辨荧光）。如图1所示，通过使用生物素化的抗AAV1抗体与链霉亲和素Eu（供体）结合的HRP抗AAV1抗体的预混合物，以及与d2标记的抗HRP（受体）结合，夹心法检测AAV1衣壳。当染料接近时，用光源（激光或闪光灯）激发供体，触发荧光共振能量转移（FRET），进而在特定波长（665 nm）发出荧光。信号强度与形成的抗原-抗体复合物的数量成正比，因此也与AAV1衣壳的浓度有关。

图1：HTRF检测AAV1原理示意图

实验需要检测样本5μl和diluent buffer预混后，加入检测抗体各5μl，盖上封板膜，室温孵育过夜，即可在酶标仪上读板。检测流程仅需二步，无需洗板和包板。适合96，384和1536孔板进行高通量检测。信号48h内保持稳定。

图2：HTRF检测AAV1流程示意图

Dynamic Range: 7.35E+09 VP/mL-2.50E+11 VP/mL

图3：HTRF检测AAV1标准品检测示意

来源于优宁维药物研发官网