宿主细胞蛋白(HCP)分析是生物制药早期临床试验、下游工艺设计和质量控制的一个重要问题。使用市售的通用HCP测定法，还是花费大量资金开发特定的HCP测定法，往往不是一个容易的决定。理论上，通用的HCP测定方法应该适用于特定细胞系的所有HCP测定，而不受细胞系修饰、发酵条件和纯化工艺设计的影响。但在大多数情况下，一般的HCP测定法不能显示出所需的特异性和敏感性。增强型的CHO|360-HCP ELISA可能是目前使用的通用市售HCP测定法的有价值替代方法，因为它旨在覆盖更广泛的CHO-HCP谱。

用模拟转染CHO K1和CHO S细胞的等量HCP免疫家兔和山羊制备多克隆HCP抗血清。我们使用不同制备的抗原:Total HCP或Fractionated HCP(Table 1)。每种HCP片段(低分子量、中分子量和高分子量)分别用于免疫。

采用优化的纯化策略获得抗总HCP的单特异性多克隆抗体。纯化前将不同HCP组分的抗血清合并。这就产生了四种不同的HCP检测方法(A型到D型)，它们共同构建了增强型通用CHO|360-HCP ELISA试剂盒(见Table 1)。对于所有四种检测类型，检测下限(LOD)：0.5-1 ng/mL；定量下限(LOQ)：2-3 ng/mL；工作范围：2-100 ng/mL。

通过CHO-HCP标准品的二维凝胶电泳和对应的A -D型ELISA抗体的免疫印迹(Figure 1)确定了四种检测方法对抗原的高特异性。作为参考，将HCP的二维蛋白模式转移到硝化纤维素膜上并用胶体金染色(见Figure 2b)。

基于大量模拟CHO-HCP样本，CHO|360-HCP ELISA试剂盒已被广泛测试。所有样品均来源于CHO细胞的模拟发酵，与某些生物制剂的生产过程相对应。对于每个HCP样品，首先用Bradford法测定蛋白质量。此外，每个样品使用五种不同的CHO-HCP测定法进行分析:BioGenes通用CHO|360-HCP ELISA A-D型和常用的市售通用CHO-HCP试剂盒(Figure 3)。蛋白质回收率以样品确定的Bradford值的百分比计算。

每个样品的回收率在很大程度上取决于所使用的测定法(Figure 3)。Sample 4 (x)使用Type D型估计回收率>90%，Type A-C的回收率要低得多，市售其他试剂盒的回收率仅为20%。在大多数情况下，使用我们的四种通用CHOI360-HCP ELISA (A-D型)中的一种来估计最佳回收率。回收率高于100%是基于各自ELISA的overestimation。