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发布日期:2025/7/28 14:54:00

以下文章来源于斯达特生物,作者斯达特生物

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噬菌体(Bacteriophage,简称“噬菌体”或“噬菌病毒”)是一类专门感染细菌的病毒。它们是由蛋白质外壳内部的遗传物质(DNA或RNA)组成。噬菌体在自然界中广泛存在,能够在细菌的表面附着并将其遗传物质注入细菌细胞内,从而利用细菌的生物机制进行复制。

 

常见的噬菌体种类

 

 

M13噬菌体的结构示意图

 

 

噬菌展示技术介绍

 

 

  • 历史背景

该技术由George Smith于1985年首创,因其在定向分子进化中的贡献,Smith与Gregory Winter共同获得2018年诺贝尔化学奖。M13因其温和特性(不裂解宿主)成为最常用的展示载体之一。

  • 基本原理

M13噬菌体是一种感染大肠杆菌的丝状噬菌体,其基因组为单链DNA。展示技术的核心是通过基因工程将外源蛋白基因与噬菌体衣壳蛋白(如pIII或pVIII)基因融合,使外源蛋白在噬菌体表面表达。

pIII蛋白:位于噬菌体末端,通常展示单拷贝的大分子蛋白(如抗体片段)。

pVIII蛋白:构成噬菌体主要衣壳,适合展示多拷贝的小肽(如10-20个氨基酸)。

  • 技术流程

  1. 基因克隆:将目标蛋白或肽的编码基因克隆到M13噬菌体的基因组中,通常是插入到编码噬菌体外壳蛋白的基因中。

  2. 噬菌体文库构建:转化改造后的M13噬菌体到大肠杆菌中,感染细菌后,噬菌体会在细菌内复制并合成外壳蛋白,同时将目标蛋白或肽展示在噬菌体表面。

  3. 亲和筛选(Panning):将噬菌体与固定化的靶分子(如抗原)孵育。洗去未结合的噬菌体,保留特异性结合的噬菌体。

  4. 扩增与富集:回收结合的噬菌体,感染大肠杆菌扩增,重复筛选3-4轮以提高结合力。

  5. 鉴定:通过测序或功能实验分析筛选出的噬菌体携带的外源基因。

The general process of biopanning

 

  • 核心优势

  1. 直接基因关联:噬菌体携带外源蛋白的编码基因,便于后续克隆。

  2. 高通量筛选:可快速筛选数百万至数十亿个分子。

  3. 无需蛋白纯化:展示的蛋白直接用于结合实验。

  • 应用领域

  1. 抗体筛选:M13噬菌体展示技术最广泛的应用之一就是单克隆抗体的筛选。通过展示不同抗体片段(如重链或轻链的可变区),可以快速筛选出与特定抗原结合的抗体。这些抗体可以用于疾病诊断、治疗等领域。

  2. 疫苗开发:可以利用噬菌体展示技术展示病原体的表面抗原,通过筛选获得与病原物质相互作用的抗原肽,这为疫苗的设计提供了线索。

  3. 药物筛选:该技术还可用于小分子药物的筛选,尤其是在寻找靶标分子或蛋白质相互作用方面。例如,通过展示小肽,可以筛选出具有特定生物活性的分子。

  4. 蛋白质-蛋白质相互作用研究:利用噬菌体展示技术,可以探究不同蛋白质之间的相互作用。例如,通过展示一个蛋白的特定片段,寻找能够结合该片段的其他蛋白质。

  5. 新型酶的开发:通过展示酶活性位点的特定肽,可以筛选出具有所需酶活性的突变体或全新酶。

 

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