迄今为止，研究者们在RNA上已经发现了百余种不同种类的化学修饰，这些修饰大都分布在丰度较高的非编码RNA中，并对非编码RNA功能的维持具有重要作用。近年来，得益于高分辨率质谱的应用以及全转录组测序技术的开发，越来越多的mRNA上的修饰被发现、精确定量和定位，包括 N6-甲基腺嘌呤（m6A）、N6，2-O-二甲基腺嘌呤（m6Am）、5-甲基胞嘧啶（m5C）、次黄嘌呤（I）、假尿嘧啶（Ψ）、N1-甲基腺嘌呤（m1A）、2′-O-甲基化（Nm）、N4-乙酰胞嘧啶（ac4C）和 N7-甲基鸟嘌呤（m7G）等。其中特别是m6A，作为真核生物mRNA中含量最丰富的内部修饰，其修饰酶、识别蛋白质的鉴定以及其广泛的生物学功能的发现，掀起了mRNA上转录后修饰研究的热潮，从而促进了新兴的研究领域——表观转录组学的诞生[1]。
2016年，Nature Methods更是将Epitranscriptome analysis（表观转录组分析）评选为年度技术。RNA 化学修饰已成为化学生物学研究领域的一个热点问题，越来越多的对于RNA化学修饰的研究推动了“表观转录组学”这个新领域的蓬勃发展[1]。
RNA N6 -甲基腺嘌呤（m6A）最早于1970年在哺乳动物mRNA中被发现，但由于受制于检测技术和分析技术的限制，之前研究的较少一些。近些年来，得益于高通量测序技术的进步和其他交叉学科的助力，相关研究正在呈现井喷式发展态势，发表文章数量上便有直观的体现（下图）。接下来我们从什么是m6A RNA修饰、m6A RNA修饰的分布、功能研究以及依托于高通量测序技术的m6A检测方法四个方面展开介绍，以便老师们对其有所了解。
资料来源：Pubmed
首先，当腺苷上的N6位发生甲基化时，即m6A甲基化，结构见下图：
m6A RNA甲基化和去甲基化周期
资料来源：Ferrufino E.（2017）
物种分布：m6A是最丰富的转录组修饰之一，在所有生命的细胞RNA中都有发现，比如病毒、酵母、植物和人类等高等动物等。
RNA种类分布：除mRNA 外，目前还发现microRNA、circRNA、rRNA、tRNA和snoRNA上都有发生m6A修饰。
mRNA位置分布：分布于mRNA 的启动子区、终止密码子区、3' UTR、5' UTR 、CDS 内。主要分布在mRNA 的 3′UTR 和 CDS 区域。
调控mRNA的稳定性：m6A修饰增强mRNA的稳定性，延长其在细胞内的半衰期；m6A修饰通过影响mRNA的降解途径来调控其稳定性。
基因表达调控：m6A修饰通过影响mRNA的稳定性和转运，间接调控基因表达水平；m6A修饰对mRNA 的不同区域（3' UTR、5' UTR、CDS）的选择性修饰可决定mRNA分子的命运，比如：降解或翻译。
染色质重塑：m6A修饰可通过影响组蛋白的修饰和染色质的开放程度，参与染色质重塑过程；m6A修饰可通过招募特定的组蛋白修饰酶和染色质重塑因子，改变染色质的结构和状态。
翻译效率：m6A修饰位于mRNA编码区，可直接影响核糖体对mRNA的识别和结合，从而调控翻译起始的效率；m6A修饰的存在可以促进或抑制核糖体亚基的组装，影响翻译的起始速度。
此外，m6A修饰还在促进环状RNA翻译、改变肿瘤发展、调控造血干细胞定向分化等方面也发挥关键作用。
目前常用m6A修饰的高通量检测技术有MeRIP-seq（Methylated RNA immunoprecipitation with next generation sequencing，甲基化RNA免疫沉淀结合高通量测序），该技术是在转录组层面研究细胞内mRNA或Total RNA的甲基化定位的技术。
MeRIP-seq依赖m6A抗体，基于抗原-抗体特异性结合的原理，免疫沉淀富集m6A修饰的RNA片段，构建测序文库，随后通过高通量测序技术进行测序。该方法不仅能定性地确认m6A的存在，还能在全基因组水平上准确定位m6A修饰位点，提供m6A修饰的全局视图，分辨率在200 nt以内。
MeRIP-seq测序建库实验流程见下图：
MeRIP-seq测序项目分析流程见下图：
生工生物工程（上海）股份有限公司自2011年成立高通量测序部以来，逐步引进了Illumina，Life，DNBSEQ，PacBio、Nanopore、等二代/三代测序平台。建立了2000平米高标准实验室（通过了国家ISO认证）并搭建了50PB级存储及运算能力的服务器集群，能满足绝大多数科研客户的研究需要。同时，生工高通量测序团队建设也在不断完善中，目前有100余专职员工，其中高级技术人员以及高级生物信息工程师占比50%以上，10年来，通过生工高通量测序服务所发表的文章累计影响因子在10000分以上。
生工生物现可提供RNA m6A甲基化测序（MeRIP-seq），感兴趣的小伙伴欢迎来电与我们技术支持沟通交流。
技术支持联系电话：021-5707 2059 / 2179
技术支持联系邮箱：ngswanglu@sangon.com / RNAseq3@sangon.com
参考文献
[1] 彭金英;伊成器.蓬勃发展的表观转录组学[J].中国生物化学与分子生物学报,2021:12.
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