均相时间分辨荧光(HTRF®)是一种基于时间分辨-荧光共振能量转移(TR-FRET)的检测技术,它结合了FRET的均相性及TRF的低背景、高灵敏度的优势(镧系元素),同时具有更稳定的供体荧光分子结构,是TR-FRET的进阶版。
独特的能量供体(专利创新点!)
HTRF®的能量供体是包含镧系元素铕(Eu)和钛(Tb)的穴状化合物。这种化合物中,Eu和Tb永久地嵌合在一个稳定的笼子里,可以通过大多数能源(如激光、LED闪光灯)激发。供体在激发后,会产生长寿命的发射光(ms级)。
PS:这个笼状结构(Eu3+)是J.M.Lehn’s教授发明的,1987年的诺贝尔化学奖!
匹配的能量受体
HTRF®的能量受体分为两种:XL665和d2,它们能够匹配Eu3+络合物发射波长。这两种受体的光学性质相似,但分子量不同。XL665是改造后的别藻蓝蛋白(APC),分子量为105KD,它可以与识别物(如抗体)结合,提高稳定性。而d2分子量约为1KD,较小的分子量可减少空间位阻,在竞争性测定中能提供更好的稳定性。
ps:Green dye(受体)匹配Tb3+(供体)
实验步骤简单,快捷
1. 分析物或样品加入微孔板中(加样)。
2. 添加检测试剂(与分析物结合的供体偶联抗体和受体偶联抗体),孵育。
3. 读取(兼容或认证HTRF®的酶标仪)。
ps:受体发出的光强度将与相互作用水平成正比。
科学的数据分析方法
HTRF®采用了比值法来处理数据,同时检测供体和受体的发射光,其中供体的发射光(620nm)为内参,用受体的发射光(665nm)评估受检生物反应的指标。两处波长的比值可以去除溶液通透率、细胞大小、细胞数量不同引起的误差。
ps:若无相互作用则只能检测到620nm处的发射光(供体)。
1.均相,操作简单快捷
无需包被!无需洗板!加样和孵育2h!就问你快不快!
2.数据真实,可重复性高
比值法可有效去除背景荧光,假阳性,假阴性率低。
3.信号稳定,检测灵敏度高,窗口大
荧光供体稳定(笼状结构),可吸收更高能的光,7天内检测信号稳定可反复读取。pg级别灵敏度,检测范围4~5log!
有图有真相!ps:数据来源PerkinElmer(Revvity)。
反复读取20次!
动态范围广!7d内信号稳定持久!独孤求败啊~
4.技术成熟,应用广,知名度高
该技术问世30余年,被广泛应用于药物研发、细胞治疗、疫苗研究等各个领域。备受国内外知名企业及专业研究人员的认可。
大佬:什么档次!跟我用的一样?
实验室服务可咨询(HTRF) (u-labex.com)
5.完整配套的仪器、试剂盒、耗材、软件、实验方案和技术支持!!!
如PerkinElmer(HTFR专利拥有者)仪器,配套的HTFR试剂盒,微孔板等等。