操作流程

1.      将FFPE切片放入1.5ml微量离心管中，加入300μl矿物油。涡旋振荡10秒。

2.      样品在80°C温度下加热2分钟。

3.      每份样品用224μl裂解缓冲液(Lysis Buffer)、25μl蛋白酶K(Proteinase K)和1μl蓝色染料(Blue Dye)制备裂解预混液(lysis master mix)。

4.      在每个样品管中加入250μl裂解预混液(lysis master mix)，涡旋振荡5秒。

5.      样品在10000xg下离心30秒。如果存在沉淀，可以吹打混匀样品。

6.      将样品管置于56°C温度下孵育30分钟。

7.      将样品管置于80°C温度下孵育2小时。

8.      取出样品，冷却至室温静置15分钟。

9.      样品以最大速度离心2分钟。

10.   将蓝色水相分入两个微量离心管中（每个约120μl）。

a.      RNase处理（管#1—DNA样品）

i.       在水相裂解物（蓝色层）中加入5μl RNase A，吹打混匀。

ii.      置于室温条件下孵育5分钟。

b.      DNase处理（管#2—RNA样品）

i.       每份裂解液加入13μl MnCl2、7μl DNase缓冲液和5μl DNase I制备DNase混合液（DNase cocktail）。

ii.      在水相裂解液（蓝色层）中加入25μlDNase混合液(DNase cocktail)，吹打混匀。

iii.     置于室温条件下孵育15分钟。

11.   设置两个Maxwell^® FFPE cartridge（一个来自Maxwell^® RSC DNA FFPE试剂盒，一个来自Maxwell^® RSC RNA FFPE试剂盒）。将管#1裂解物（含DNA）转移至Maxwell^® RSC DNA FFPE cartridge中的孔#1，将管#2裂解物（含RNA）转移至Maxwell^® RSC RNA FFPE cartridge中的孔#1。

最终分别以50μl无核酸酶水(Nuclease-Free Water)洗脱。

12.   启动仪器的操作程序：Maxwell^® RSC仪器上的DNA FFPE或RNA FFPE操作程序，具体取决于核酸种类。

图1: 从FFPE切片样本中提取的DNA浓度(三种组织类型)。通过对75bp、150bp和300bp靶标进行多重qPCR来测定DNA浓度，并通过人gDNA标准曲线来定量浓度（用试剂盒ProNex^® DNA QC Assay ABI 7500/7500FAST（Cat.#NG1002）扩增）。数据显示为n=3的平均值±标准偏差。

图2. 用从FFPE切片中分离的RNA进行RT-qPCR的Cq值（三种组织类型）。用RNA特异性Beta-2微球蛋白引物和GoTaq®1-Step RT-qPCR System（Cat.#A6020）扩增RNA。数据显示为n=3的平均值±标准偏差.

我们可以提供130多份不同样本类型的应用操作说明，为您提供了许多操作细节和提取纯化的数据。