Lumit®免疫检测法用于监测PROTAC和分子胶相互作用及三元复合物形成

蛋白酶体靶向嵌合体（PROTACs）是一种异双功能小分子，该分子被设计用于降解特定的目标蛋白。由于PROTACs提供了一种新的药物开发作用机制，因此其在治疗上具有巨大的潜力。为了继续促进PROTACs领域的快速发展，需要高通量筛选技术来发现针对不同蛋白质和E3连接酶的新PROTACs。

Lumit^® Anti-Tag Protein Interaction Reagents使研究人员能够在均质（无需洗涤）检测模式下，检测二元复合物相互作用及由PROTAC介导的三元复合物形成。

01检测原理及优势

Lumit^® Anti-Tag Protein Interaction Reagents 包括一系列针对常见蛋白标签（例如，His-、Flag® -、GST-tag 和人 Fc）的 LgBiT 标记抗体以及 SmBiT 标记的链霉亲和素，仅需“添加-读取”操作简单，适合多重检测和高通量筛选，可体外检测蛋白质-蛋白质和蛋白质-小分子相互作用。其特点如下：

• 真正基于溶液的检测方法；

• 简化工作流程，无需固定或洗涤步骤，可以在 120 分钟 内完成检测；

• 生物发光法更加灵敏。

具体技术信息请查看往期帖子：新品发布 | 简单、快速、高灵敏度的蛋白质互作检测系统

02监测三元复合物形成

以BRD3(BD2)作为目标蛋白，我们使用Lumit^® Anti-Tag Protein Interaction Reagents中的Lumit^® Anti-DYKDDDDK-LgBiT（识别常用于标记蛋白质的 FLAG^® 标签）和anti-GST-SmBiT监测了PROTAC介导的三元复合物（cereblon复合物和VHL复合物）形成。

上图. Lumit^® Anti-Tag Protein Interaction Reagents可以确定不同PROTAC的相对效力。图A. 与cereblon复合物+BRD3(BD2)和dBET1或dBET6形成的三元复合物。图B. 与VHL复合物+BRD3(BD2)和ARV-771或MZ1形成的三元复合物。这些实验表明dBET6比dBET1更有效力，并且显示出ARV-771和MZ1之间效力相似。在这两个系统中，在高浓度PROTAC下观察到特征性的钩状效应。

03检测分子胶与cereblon复合物的相互作用

上图.检测分子胶与cereblon复合物的相互作用。为了确定分子胶的相对亲和力，我们将它们滴定到cereblon-沙利度胺tracer复合物中。随着tracer的竞争移除，发光信号减少。相对IC₅₀值与在裂解细胞中进行的靶标占据检测结果相关。

04检测PROTAC小分子和BET蛋白的相互作用

上图.为了确定连接子和cereblon结合配体如何影响PROTAC与BET家族成员的相互作用，我们观察了HJB97及其衍生物PROTAC（PROTAC BET Deg. 1和2）以及JQ1及其衍生物PROTACs（dBET1和dBET6）的相对IC₅₀值。我们发现linker和E3结合配体增强了结合力。这些研究与来自裂解细胞的靶点结合实验结果相关联（未显示），表明这两种检测方法都可以用来筛选linker对目标亲和力的影响。

05产品信息及相关资源