无论是流式分析、原代细胞培养、单细胞测序……都离不开组织单细胞悬液的制备，因此如何高效、可重复性地制备一个高质量的单细胞悬液至关重要。今天小优跟大家唠唠，给大家安利制胜一招~

组织单细胞悬液制备方法可分为两类：手动（机械法、酶解法、化学法）或自动（gentleMACS全自动组织处理器）。我们发现手动处理组织样本时，很难有统一的标准。就机械法来说，每次实验研磨的力道稍有不同，对细胞造成的损伤也不一样，因此很难保证实验的重复性。不仅如此，处理样本的过程中，细胞可能会出现“死亡、碎片化、粘连”的情况，真是“一波未平一波又起”。

不过大家也不用担心，gentleMACS组织处理器让组织处理成为享受！导师再也不用担心我的组织制备成单细胞悬液后，细胞却死光光了。

gentleMACS全自动组织处理器可快速、温和、安全、自动、便捷和标准化地将组织（如脾脏、肝脏、肿瘤、表皮等）处理成单细胞悬液，可谓是组织样本处理的绝好帮手。其包含全自动组织处理器、专利解离管和针对不同组织优化的解离试剂盒，以及预设软件程序在内的整体方案，实现对不同组织样本的优化解离，确保细胞的活力、功能和表面表位的完好。gentleMACS全自动组织处理器不仅能够确保每一次解离都在优化条件，而且解放双手，结果也可以轻松重复。

口说无凭，小优也给大家带来了“真材实料”，以下数据来源于某次美天旎gentleMACS全自动组织处理器demo体验日。

1. 将CT26肿瘤组织均分为两份，每份为0.06g。

2. 其中一份使用机械法，另外一份按照下面的步骤使用gentleMACS全自动组织处理器处理：

1) 配制解离酶储备液：本次实验使用的解离试剂盒为：130-096-730，Tumor Dissociation Kit, mouse。使用3 mL RPMI 1640重溶Enzyme D冻干粉，2.7 mL RPMI 1640重溶Enzyme R冻干粉，1 mL Buffer A重溶Enzyme A冻干粉；重溶后上述酶溶液分装保存于-20℃；

2) 配制混合酶溶液：对肿瘤组织清除脂肪、纤维和坏死区域后进行称重，重量为0.06 g，0.04-1 g的肿瘤组织需使用2.5 mL左右的混合酶溶液，即2.35 mL RPMI 1640+100 uL Enzyme D+50 uL Enzyme R+12.5 uL Enzyme A（可用gentleMACS C管配制）；

3) 组织前处理：将肿瘤组织需剪成2-4 mm小块，再转移到上述含有混合酶溶液的C管中，拧紧管盖，倒置；

4) gentleMACS全自动组织处理器操作：开启仪器电源，将含有肿瘤组织和混合酶溶液的C管倒置放在gentleMACS全自动组织处理器上，将加热套管放置于C管上，选择程序37C_m_TDK_1。

3. 过滤：仪器运行结束后，取下加热套管和C管，使用70 um筛网对单细胞悬液进行过滤至50 mL离心管中。可以看到手动处理仍残留一些组织团块，而gentleMACS全自动组织处理器处理后基本无组织团块。

图1：过滤后手动处理组和gentleMACS全自动组织处理器组比较

4. 使用10 mL RPMI 1640润洗一遍筛网，液体同样收集到上述50 mL离心管中。

5. 300 xg离心7分钟，弃上清，加入适量RPMI 1640重悬，进行镜检。手动处理获得总细胞数为3.9*10^6，自动处理获得总细胞数为1.5*10^7，约为手动的3.8倍。

图2：手动处理组和gentleMACS全自动组织处理器组镜检比较

                                                                          想要获得高品质单细胞悬液，

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