文献 | 心梗后糖尿病患者早期使用SGLT2i的抗炎机制探秘
心梗后糖尿病患者早期使用SGLT2i的抗炎机制探秘
糖尿病患者发生急性心肌梗死（AMI）后，死亡风险比非糖尿病患者高2-3倍，其中心脏-肾脏并发症是糖尿病相关死亡的主要原因。虽然钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂（SGLT2i，如恩格列净）已被证实能改善2型糖尿病（T2DM）合并AMI患者的预后并减轻炎症负担，但其背后的具体机制仍不明确。同时，临床实践中SGLT2i的启动时机（立即或延迟数月）也存在疑问。
「READING」
近期由英国林肯大学的 M. U. Shah、C. L. Cliff 等学者在发表在《Diabetic Medicine》发表了一篇 Study Protocol，该研究旨在深入探索钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂（SGLT2i）在心梗后糖尿病患者中发挥心脏-肾脏-代谢保护作用的潜在机制。解答这两个核心问题：
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SGLT2i如何提供保护？
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早期干预是否效果更佳？
01
主要研究思路
研究对象和干预方案：计划招募66名近期发生AMI的T2DM患者，并将其随机分为两组：
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A组（早期干预组）：在心梗后立即开始使用恩格列净（10mg/日）。
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B组（延迟干预组）：在心梗后3个月才开始使用恩格列净（10mg/日）。
说明：每个组各30名患者，并预留10%的名额以应对可能的参与者退出情况。
研究随访与样本分析技术：
所有受试者随访6个月（A组随访：0, 30, 90, 180天；B组随访：0, 30, 90, 120, 180天），每次访视采集患者的血液样本。该研究不仅检测血液中的生物标志物，更侧重于从患者血液中分离出单核细胞来源的巨噬细胞（MDMs），在细胞水平上进行深入的功能性分析。
02
主要研究方法
👉 NLRP3炎症小体活化：
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Caspase-Glo® 1 Inflammasome Assay（Promega）：检测炎症小体核心蛋白caspase-1的活性，caspase-1活性是衡量炎性小体激活程度的金标准指标；
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qRT-PCR ：检测巨噬细胞中炎症因子（如IL-1β, IL-6, TNF-α）的mRNA水平，反映炎症小体的“启动”状态。
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Lumit® Cytokine Immunoassay（Promega）： 检测细胞培养上清液中释放出的炎症因子的蛋白（IL-1β, IL-6, TNF-α）水平。
👉 细胞衰老与细胞衰老相关分泌表型（SASP）：
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qRT-PCR： 检测细胞衰老标志物（如p21, p27）、凋亡相关基因（Bcl-2, Bax）以及SASP因子（IL-8, IL-11）的基因表达。
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ELLA™ 自动化免疫分析： 检测血浆中经典的SASP蛋白标志物，如单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、骨桥蛋白（OPN）和Serpin E1。
👉 机制探索 - Cx43半通道功能抑制：
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ATP释放实验： 使用发光法检测细胞释放ATP的情况。ATP是激活NLRP3的关键危险信号分子。研究者假设，恩格列净可能通过抑制连接蛋白43（Cx43）半通道的异常开放来减少ATP释放，从而从源头上抑制炎症小体。他们会使用特定的Cx43半通道阻滞剂（Tonabersat和Peptide 5）来验证这一假设。
03
结论与展望
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证实恩格列净可通过抑制NLRP3炎症小体活性和SASP表达来减轻 sterile inflammation（无菌性炎症）。
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证明恩格列净的上述作用可能通过抑制Cx43半通道的异常开放来实现。
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最重要的一点，论证早期（心梗后立即） 使用恩格列净比延迟（3个月后） 使用能带来更强效的抗炎和抗衰老保护作用。
本文不仅深入揭示SGLT2i的心脏-肾脏保护机制，为其临床应用提供坚实的理论基础，更重要的是，它将直接指导临床用药时机，推动对高风险糖尿病患者更早、更有效地实施干预策略，从而改善预后。
04
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Caspase-Glo®1 Inflammasome Assay 是一种结合酶系统的生物发光法检测试剂盒，使用Z-WEHD-氨基萤光素底物和Ultra-Glo™萤光素酶，用于监测Caspase-1活性。该方法仅测量具有催化活性的 Caspase-1 酶，无需样本制备，可快速完成检测。
图. 生物发光的基于细胞的测定方法检测分泌的IL-1β和caspase-1激活作为炎性小体激活的功能性读数。
Lumit® Cytokine Immunoassay 采用NanoBiT®萤光素酶技术。抗体被分别标记上两种NanoBiT®亚基——小亚基(SmBiT)和大亚基(LgBiT)。当抗体与分析物结合时，SmBiT和LgBiT靠近从而产生生物发光信号。
该方法是均质法的即用型检测试剂盒，简单的加样-读数操作模式无需洗涤，可以在70分钟之内快速简便的完成检测。同时可提供其他Lumit®即用型检测试剂盒，包含HMGB1, IL-1β，IL-18, IFN-γ, IL-2等十余种靶标。
