酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)溶液配制方法，每个细节都讲到，实验室每天都要用到

一、制备酚和酚氯仿

多数批号的商品化液态酚都是透明和无色的，不需要重蒸可以直接用于分子克隆。有时，买来的液态酚变成粉红或者黄色，这种状态的药品不能再使用。

另外，不提倡使用结晶酚，因为它需要在160℃重蒸除去氧化物醌，醌会导致磷酸二酯键断裂或者使RNA和DNA交联。

注意:酚具有强腐蚀性，会灼伤皮肤，使用酚的时候应该戴手套、护目镜和穿防护衣，操作时在通风橱内进行。一旦酚溅到皮肤上应该立即用大量的水冲洗，并用肥皂洗涤，不能用乙醇冲洗。

二、平衡酚

使用前，必须将酚平衡到pH>7.8，因为DNA在酸性条件下会进入有机相。

1、液态的酚应该储存在-20℃，使用时升温到室温，然后放在68℃下加热溶解，加入羟基喹啉至终浓度为0.1%，羟基啉是抗氧化剂和RNAase的部分抑制剂，还是金属离子的弱整合剂。另外，酚的黄色提供了一个简便区分有机相和水相的方法。

2、对于熔化的酚，加入等体积的缓冲液〔室温加入0.5 mol/L的 Tris·HCl(pH 8.0)],磁力搅拌15分钟后关掉磁力搅拌器，当两相分离后，用带真空的玻璃移液器尽可能多地把水相吸掉。

3、加入等体积的0.1mol/L的 Tris·HCI(pH 8.0)，磁力搅拌器搅拌15分钟后停止搅拌，按照第二步操作那样尽量吸掉上层的水相，多次重复用Tris·HCI萃取，直到酚相的 pH值大于7.8(用pH试纸测量)。

当酚最终平衡好后，应该吸掉最后的水相，加入0.1倍体积的0.1mol/L的TrisHCI(pH8.0)(含0.2%β-巯基乙醇)。含100mmol/L Tris·HCI(pH8.0)的饱和酚溶液放在棕色瓶内4℃可保存一个月。

三、酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)

含等量酚-氯仿-异戊醇的混合物常在抽提核酸的实验中使用，以除去蛋白质。氯仿能够使蛋白质变性，并且有助于水相和有机相分离，异戊醇可以减少萃取过程中产生的泡沫。

氯仿和异戊醇在使用前都不需要预处理，酚-氯仿-异戊醇混合物可以储存在100mmol/l,Tris·HCl(pH8.0)溶液中，放在棕色瓶中4℃可保存一个月。