降本增效：糖基化在蛋白类药物开发中的创新应用

蛋白质糖基化是指在糖基转移酶作用下将糖转移至蛋白质，和蛋白质上的氨基酸残基形成糖苷键的过程。糖基化是对蛋白的重要的修饰作用，具有调节蛋白质功能的作用。咨询订购热线：400-021-8158

糖基化过程

N-糖链合成起始于内质网，完成于高尔基体。在内质网形成的糖蛋白具有相似的糖链，由Cis面进入高尔基体后，在各膜囊之间的转运过程中，发生了一系列有序的加工和修饰，原来糖链中的大部分甘露糖被切除，又被多种糖基转移酶依次加上了不同类型的糖分子，形成了结构各异的寡糖链。糖蛋白的空间结构决定了它可以和那一种糖基转移酶结合，发生特定的糖基化修饰。
许多糖蛋白同时具有N-糖链和O-糖链。O-糖基化在高尔基体中进行，通常的一个连接上去的糖单元是N-乙酰半乳糖，连接的部位为Ser、Thr和Hyp的OH基团，然后逐次将糖基转移到上去形成寡糖链，糖的供体同样为核苷糖，如UDP-半乳糖。糖基化的结果使不同的蛋白质打上不同的标记，改变多肽的构象和增加蛋白质的稳定性。
为什么使用糖基化

由于婴儿潮和老年人口日益增多，医疗保健的支出也水涨船高。生物类药物一方面方兴未艾，另一方面昂贵异常，普通病人难以承担。
生物制药为什么如此昂贵？
1、前期开发费用高，用于一个生物制药新药研发费用超过10亿美金；
2、耗时长，有时甚至长达8年；
3、失败率高
如何降低费用？
降低费用的方向是提高研发效率。研发效率体现在快速正确选择或者快速试错及时放弃失败的方案。比较聪明的方法：富集药物 - 通过糖基化方法增加药物的浓度。
为什么选择糖基化
在细胞株开发的时候优化药物糖基化的优点：
可以大大提高安全性和有效性
可以极大地降低成本
增强生物仿制药行业的管理和商业化压力（糖基化的主要特性要与所开发的药物相匹配）
通过糖基化进行生物药物修饰的优势：

1、显著增强药物复杂性和非均匀性

2、影响药物活性。

不同药物按反应活性分为三种糖型：

低活性糖主导的药物 - 效力较弱,可变性较差；
（目前低活性糖处于生物药的主导地位）

中活性糖主导的药物 - 效力较强,可变性较好；

高活性糖主导的药物 - 效力强,稳定一致；

如何进行糖基化

如何通过糖型改变提高药物？

Ludger生物科学公司是一家专注于测量与控制生物医药糖基化的公司，技术适用于在FDA的质量控制和EMEA批准的全球生物制药企业，支持IND申报。Ludger的客户包括世界各地领先的制药公司和生物技术公司。Ludger药品生产涵盖了全面的与ICH兼容的生物医药糖基化分析试剂和检测试剂盒。产品包括多糖释放、标记和纯化、标记聚糖、多糖HPLC柱,内糖苷酶和糖蛋白标准.同时Ludger将继续开发新的产品,以确保为您提供更高品质产品。作为Ludger授权代理商，西宝生物竭诚为您服务。欢迎来电400-021-8158垂询产品详情或索取产品说明书。

糖基化检测过程

Ludger的糖基化系列产品包括多糖释放、分离不同类型糖、相对分子质量测定及糖链测序等步骤。

第一步：多糖释放

为分析糖蛋白类型中糖聚合物的结构必须被首先分离糖和蛋白质, 这需要化学方法和酶方法。

1、化学法释放多糖

在化学方法中, 可以通过使用肼解迅速分开O-或N-糖,或控制条件仅分离O-糖。

相关产品：

商品型号	品名	包装	说明
LL-HYDRAZ-A2	Hydrazinolysis Kit N-聚糖和O-聚糖释放试剂盒	2 Reaction Sets	用于从糖蛋白生物药中N-多糖和O-多糖释放，进行下游分析。
LL-ORELA-A2	Orela Kit O-聚糖释放试剂盒	2 Reaction Sets	用于从糖蛋白治疗中释放O-连接的聚糖

2、酶法释放多糖

在酶方法中, 用肽N-糖苷酶F(PNGase F)分离N-连接的糖是可能的而且有用的。可是, 能与O-连接的糖广泛反应的酶还未被发现。

相关产品：

商品型号	品名	包装	说明
E-PNG01	PNGase F (Peptide N Glycosidase F) 糖基肽酶（肽N糖苷酶F）	0.3 Unit/60μl	用于从糖蛋白中酶解多糖
E-rPNG01	Recombinant PNGase F 重组糖基肽酶	0.3 Unit/60μl	用于从糖蛋白中酶解多糖
E-G001	O-Glycosidase O-糖苷酶	5 mUnit/60μl	用于从糖蛋白中酶解多糖
E-EF01	Endoglycosidase F1 内切糖苷酶F1	1 Unit/60μl	用于从肽和蛋白质中切割高甘露糖和一些杂合型N-聚糖
E-EF02	Endoglycosidase F2 内切糖苷酶F2	0.3 Unit/60μl	用于从糖蛋白中切割N-连接（天冬酰胺连接）的双十元寡糖
E-EF03	Endoglycosidase F3 内切糖苷酶F3	0.33 Unit/60μl	用于从肽和蛋白质中选择性释放三元和α（1-6）岩藻糖基双十元N-聚糖
E-EH02	Endoglycosidase H 内切糖苷酶H	0.3 Unit/60μl	用于裂解天冬氨酸连接杂交或高甘露糖低聚糖
E-XBG01	Endo-β-Galactosidase Endo-β-半乳糖苷酶	0.9 Unit/60μl	用于切割内部的β（1-4）半乳糖键
KE-DG01	Enzymatic CarboRelease Kit 酶的糖释放试剂盒	20 µL of each enzyme	用于从糖蛋白中酶解多糖
KE-DGMX	Enzymatic DeGlycoMx Kit 酶的糖释放试剂盒	20 µL premix	用于从糖蛋白中酶解多糖

第二步：多糖的标记

因为糖自身没有发色基团,为了在分离纯化和结构鉴定过程中能够更有效地检测到糖链,往往要对其进行标记或衍生化,这对于微量糖链的分离分析是十分必要的。凡是具有半羧醛羟基的糖链都可以通过还原胺化反应来实现紫外及荧光衍生化。常用的紫外和荧光衍生化试剂有对氨基苯甲酸乙酯(ABEE)、乙酰氨基吖叮酮(AA2Ac)、氨基奈、3,62三磺酸(ANTS) 、2-氨基吡啶(2AP) 和2-氨基联苯胺(2AB) 等。其中2-AP ,2-AB适用范围较广, 应用较多,标记试剂盒已经商品化,而且其衍生化糖链的标准糖谱已经初步建立。

相关产品：

商品型号	品名	包装
LT-KAB-A2	2-AB Glycan Labeling Kit 2-AB 多糖标记试剂盒	2 Reaction Sets
LT-KAB-VP24	2-AB Glycan Labelling Kit (2PB Reductant) 2-AB多糖标记试剂盒,2PB还原剂	2 Reaction Sets
LT-KAB-VP96	2-AB Glycan Labelling Kit (2PB Reductant) 2-AB多糖标记试剂盒,2PB还原剂	2 Reaction Sets
LT-KAA-A2	2-AA Glycan Labeling Kit 2-AA 多糖标记试剂盒	2 Reaction Sets
LT-KAA-VP24	2-AA Glycan Labelling Kit (2PB Reductant) 2-AA多糖标记试剂盒,2PB还原剂	2 Reaction Sets

第三步：多糖的分离纯化

分离纯化是糖链结构研究过程中至关重要的一个环节,只有在各糖链组分被鉴定为单一纯品时,对其进行结构分析才更准确和有意义。

相关产品：糖蛋白结构分析用多糖纯化柱

商品型号	品名	包装	说明
LC-S-A6	S Cartridges S 多糖纯化柱	6 cartridges	用于从混合物中分离多糖成分
LC-T1-A6	T1 Cartridges T1 多糖纯化柱	6 cartridges	用于从混合物中分离多糖成分
LC-EB10-A6	EB10 Cartridges EB10 多糖纯化柱	6 cartridges	用于从混合物中分离多糖成分，含有无空EI matrix，很容易去除盐和去垢剂成分
LC-EC50-24	EC50 Cartridges EC50多糖纯化柱	24 cartridges	用于从混合物中分离多糖成分

第四步：多糖分析

多糖分析通常采用HPLC法、UPLC法或者MALDIMS分析。

相关产品：

商品型号	品名	包装
LS-R-BPTX10	LudgerSep R BPT Solvent BPT缓冲溶液	50ml
LS-N-BUFFX40	LudgerSep Ammonium Formate Buffer, pH 4.4 甲酸铵缓冲溶液,pH 4.4	50ml
LS-N2-2.0x150	LudgerSep N2 HPLC Column N2 HPLC 色谱柱	2.0 x150 mm, 5 um
LS-C3-7.5x75	LudgerSep C3 HPLC Column C3 阴离子色谱交换柱	7.5 x75 mm
CAA-NGA2F-01	NGA2F Glycan, 2-AA Labeled NGA2F多糖标准品, 2-AA 标记	100 pmol
CAA-FA2G1-01	G1F Glycan, 2-AA Labeled G1F多糖标准品, 2-AA标记	100 pmol
CAA-NA2F-01	NA2F Glycan, 2-AA Labeled NA2F多糖标准品, 2-AA标记	100 pmol
CAA-MAN5-01	Man-5 Glycan, 2-AA Labeled Man-5 多糖标准品, 2-AA 标记	100 pmol
CAA-A1F-01	A1F Glycan, 2-AA Labeled A1F多糖标准品, 2-AA 标记	100 pmol
CAA-A1-01	A1 Glycan, 2-AA Labeled A1 多糖标准品, 2-AA标记	100 pmol
CAA-NGA2-01	NGA2 Glycan, 2-AA Labeled NGA2 多糖标准品, 2-AA 标记	100 pmol
CAA-A2G1-01	A2G1 Glycan, 2AA Labeled A2G1 多糖标准品, 2AA 标记	100 pmol
CLIBN-IGG-01	IgG N glycan library IgG N-多糖文库	25 μg
CAB-IGG-01	IgG N glycan library, 2AB-labelled IgG N-多糖文库，2AB标记	200 pmol

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