星品 | DAPI染色——解密细胞核的密码
DAPI染色-解密细胞核的密码
DAPI全称4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，是一种能够与DNA强力结合的蓝色荧光染料，常用于细胞核染色。DAPI可以和双链DNA富含AT序列的小沟结合，产生比自身强20多倍的蓝色荧光。和EB(ethidium bromide)相比，DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。
DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364 nm，最大发射波长为454 nm。本产品（Coolaber#SL7100）可以直接用于固定细胞或组织的细胞核染色。
壹
操作过程
1. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行DAPI染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的DAPI染色。
2. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量DAPI染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。
3. 室温放置3-5 min。
4. 吸弃DAPI染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤3次，每次5 min。
5. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。
贰
产品特点
高选择性
DAPI主要结合DNA，对RNA和蛋白质的结合亲和力较低，因此适用于细胞核染色。
DAPI具有较低的细胞膜渗透性，因此主要用于固定细胞或组织的DNA染色。由于其渗透速度慢，通常用于死细胞的染色。
与双链DNA结合后荧光强度显著增强，灵敏度高。
叁
应用领域
细胞核染色：DAPI常用于细胞核染色，尤其适用于固定细胞或组织的细胞核染色，包括酵母、植物、动物细胞等。
凋亡检测：由于凋亡细胞的DNA发生碎片化，DAPI染色强度会增强，因此常用于凋亡检测。
多色荧光染色：DAPI发出的蓝色荧光与其他的绿色、黄色或红色荧光蛋白形成鲜明对比，与其他荧光染料（如绿色荧光蛋白GFP或红色荧光染料Texas Red）结合使用时，可以实现多色荧光标记，便于观察细胞内不同结构。
肆
使用效果
产品对比：
图1 不同样本DAPI染色与B公司结果对比图
注意事项：
（1）DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
（2）荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
（3）为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液(Coolaber#SL1840)。
（4）低浓度的DAPI不容易穿透活细胞的细胞膜，原生质体等活细胞染色建议使用Hoechst染料，如Hoechst 33258 (Coolaber# SL7111) 和Hoechst 33342 (Coolaber#SL7130/SL7131) 等。
（5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
（6）本产品仅作科研用途！
伍
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