多功能
自动化
FFPE
核酸
提取
FFPE切片提取
FFPE切片是核酸纯化样本中常见又具有一定挑战性的样本类型，高效快速的提取FFPE组织的DNA和RNA是多个应用领域的需求。Promega开发的基于Maxwell® RSC纯化仪的FFPE提取解决方案，为用户提供了高效可靠的工作流程。
这里将为大家详细展示
FFPE切片样本
提取的操作流程
实验材料及实验分析方法
样本：肺癌，乳腺癌，大肠癌的FFPE组织切片(10μm sections)
仪器：Maxwell® RSC Instrument
配套试剂盒:
Maxwell® RSC RNA FFPE Kit (Cat.# AS1440)
Maxwell® RSC DNA FFPE Kit (Cat.# AS1450)
下游实验分析: qPCR和RT-qPCR扩增
操作流程
1. 将FFPE切片放入1.5ml微量离心管中，加入300μl矿物油。涡旋振荡10秒。
2. 样品在80°C温度下加热2分钟。
3. 每份样品用224μl裂解缓冲液(Lysis Buffer)、25μl蛋白酶K(Proteinase K)和1μl蓝色染料(Blue Dye)制备裂解预混液(lysis master mix)。
4. 在每个样品管中加入250μl裂解预混液(lysis master mix)，涡旋振荡5秒。
5. 样品在10000xg下离心30秒。如果存在沉淀，可以吹打混匀样品。
6. 将样品管置于56°C温度下孵育30分钟。
7. 将样品管置于80°C温度下孵育2小时。
8. 取出样品，冷却至室温静置15分钟。
9. 样品以最大速度离心2分钟。
10. 将蓝色水相分入两个微量离心管中（每个约120μl）。
a. RNase处理（管#1—DNA样品）
i. 在水相裂解物（蓝色层）中加入5μl RNase A，吹打混匀。
ii. 置于室温条件下孵育5分钟。
b. DNase处理（管#2—RNA样品）
i. 每份裂解液加入13μl MnCl2、7μl DNase缓冲液和5μl DNase I制备DNase混合液（DNase cocktail）。
ii. 在水相裂解液（蓝色层）中加入25μlDNase混合液(DNase cocktail)，吹打混匀。
iii. 置于室温条件下孵育15分钟。
11. 设置两个Maxwell® FFPE cartridge（一个来自Maxwell® RSC DNA FFPE试剂盒，一个来自Maxwell® RSC RNA FFPE试剂盒）。将管#1裂解物（含DNA）转移至Maxwell® RSC DNA FFPE cartridge中的孔#1，将管#2裂解物（含RNA）转移至Maxwell® RSC RNA FFPE cartridge中的孔#1。
最终分别以50μl无核酸酶水(Nuclease-Free Water)洗脱。
12. 启动仪器的操作程序：Maxwell® RSC仪器上的DNA FFPE或RNA FFPE操作程序，具体取决于核酸种类。
RESULT
实验结果数据
图1: 从FFPE切片样本中提取的DNA浓度(三种组织类型)。通过对75bp、150bp和300bp靶标进行多重qPCR来测定DNA浓度，并通过人gDNA标准曲线来定量浓度（用试剂盒ProNex® DNA QC Assay ABI 7500/7500FAST（Cat.#NG1002）扩增）。数据显示为n=3的平均值±标准偏差。
图2. 用从FFPE切片中分离的RNA进行RT-qPCR的Cq值（三种组织类型）。用RNA特异性Beta-2微球蛋白引物和GoTaq®1-Step RT-qPCR System（Cat.#A6020）扩增RNA。数据显示为n=3的平均值±标准偏差.
我们可以提供130多份不同样本类型的应用操作说明，为您提供了许多操作细节和提取纯化的数据。
|
生物 液体 |
细胞 组织 |
环境 样本 |
微生物 病毒 |
|
血液 |
哺乳动物 组织 |
粪便 |
细菌 |
|
唾液与 粘液 |
FFPE |
土壤 |
真菌 |
|
血浆 血清 |
植物 昆虫 |
水 |
古细菌 |
|
尿液 |
拭子 |
废水 |
原生 生物 |
仪器信息表
所有Maxwell®核酸提取仪系列分为1-24通量和1-48通量两种型号的仪器，都带有去污染的紫外线灯和平板电脑的配置。同时可根据需求选配核酸定量用的荧光计仪器QuantusTM Fluorometer。
我们为任何Maxwell®仪器提供现场演示，解答您的问题。如需要更多仪器信息和购买仪器，请拨打下方电话与我们联系。
010-58256268
