胰高血糖素样肽-1（GLP-1）是一种关键的肠促胰岛素分泌激素。GLP-1作用于GLP-1受体（GLP-1R），通过增强葡萄糖依赖性的胰岛素分泌、抑制胰高血糖素分泌和减缓胃排空来降低血糖。它通过减少食物摄入量来降低体重。因此，GLP-1的肽类似物已被开发用于治疗2型糖尿病和肥胖，具有降低心血管风险的有益结果。
胰高血糖素样肽-1受体（GLP-1R）是一种B类G蛋白偶联受体。B类受体的结构与正构激动肽复合物确定，但在没有正构配体的情况下，它们的胞外结构域（ECD）构象知之甚少，这限制了对其激活机制的了解。文章报道了全长人类GLP-1R在非活性状态下的3.2 A分辨率、无肽的晶体结构，这揭示了ECD的一个独特的封闭构象。二硫键交联验证了封闭构象的生理相关性，而负染电镜（EM）和分子动力学（MD）模拟表明，ECD有很大程度的构象动力学，结合GLP-1所必需的。
从细胞稳转过表达，到细胞表面结合实验以及下游cAMP检测，文章作者都给予了详细的描述，参考下文：
利用快速变化定点突变，将野生型GLP-1R和GLP-1R突变体克隆到表达受体pcDNA3.1/V5-His-TOPO载体InvitIII和EcoRI位点，并在天然信号序列后插入标记。受体克隆的序列经DNA测序确认。该GLP-1R结构与未标记的人类GLP-1R具有相同的药理学作用基于cAMP分析。HEK293T细胞在DMEM中培养，添加10%（v/v）胎牛血清、50IUmL-1青霉素和50μg mL-1链霉素。细胞在37°C和5%二氧化碳的培养箱中保存，并在转染前接种于6孔细胞培养板上。过夜培养后，用Lip2000转染试剂共转染pGloSensor™−22FcAMP质粒和GLP-1R DNA。24h后，检测到突变体的表达量为野生型的90%-100%，用于后续实验。转染后的细胞接种到384孔板上（15000个细胞/孔）。过夜培养后，转染后的细胞与200μg mL−1D-荧光素在37°C和5%二氧化碳的培养箱中孵育1小时。细胞用Hank’s Balanced Salt Solution或1 mM DTT处理10 min，然后同浓度GLP-1（0-2μM）的盐溶液中室温孵育20 min。
在稳定过表达SNAP标签的人GLP-1R（PerkinElmer质粒）的H293T中，检测了Fab7F38对GLP-1介导的cAMP产生的影响。细胞铺到384孔板上（2000个细胞/孔）。48小时后，使用PBS洗涤，加入缓冲液（HBSS补充Ca2+和Mg2+，10nM HEPES，0.1%F-68和500µM IBMX，pH 7.4）不同浓度的GLP-1（0µM-1µM）存在（100nM和1000nM）或没有Fab7F38 37°C 30 min。使用Gs Dynamic Kit（PerkinElmer）测量cAMP的积累。
文章通路信号研究实验结果显示如下：
GLP-1R-Fab7F38复合物的整体结构示意如上图a所示：Fab、ECD（残基R24-E127）和TMD（残基E128-F257和E262-L422）分别被染成灰色、橙色和蓝色。与ECD相互作用的ECL1（K202-S223）和ECL3（F369-K383）残基显示为红色。负变构调制器（NAM；PF-06372222）显示为带有黄色碳的球体。全长GLP-1R与之前的TMD结构的叠加（青色，PDB：5VEW）。cAMP结果显示，添加Fab对GLP-1R活性没有影响。数据显示为平均± s.e.m.三个独立实验的重复进行。
ECD-ECL1/3二硫键交联研究。在GLP-1R-Fab7F38复合物结构中，ECD与ECL1或ECL3之间的相互作用。ECD、ECL1/3和TMD分别为橙色、红色和蓝色。给出了Q37-L379和E127- Q211的Cβ-Cβ距离，并用绿色虚线标记。GLP-1R双突变体E127C/Q211C和Q37C/L379C的二硫键交联研究。GLP-1诱导的cAMP检测突变体E127C/Q211C和Q37C/L379C ，添加的1mMDTT其特性接近于野生型。每个实验都重复进行。以野生型样品作为对照。
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