Blocker在靶向捕获实验中的核心功能是防止文库接头部分的非特异性杂交，从而提升目标区域的富集效率。Blocker的示意图可以见图1绿色部分，相信不少细心的小伙伴已经发现了，我们的Blocker可以和接头序列结合，从而阻止接头区域不同分子之间形成杂交双链状态，从而保证我们的中靶率可以维持在一定的水平。基于此可以在一定的数据量情况下，提高捕获区域的中靶率，提高我们目标区域的测序深度。
图1 blockers示意图（绿色部分）
是的，不同测序平台的文库杂交捕获实验都是需要Blocker的。
华大文库：
Blocker的选择需考虑其与华大接头的对应性，确保Blocker序列能够有效封闭，同时避免与目标区域的潜在交叉反应。这要求Blocker设计时需高度定制，并且针对探针库进行优化，确保封闭效率最大化。
Illumina TS文库：
理想情况下，Blocker应能有效封闭TS接头全长，同时保持对探针的低干扰，确保目标区域的高效捕获。这涉及对Blocker序列的化学修饰或浓度优化。
Illumina Tn5转座酶介导的文库：
Tn5转座酶技术因其快速、简便、便于自动化工作站操作而在测序中日益流行。针对Tn5平台，Blocker设计需考虑Tn5文库的接头序列不同于TS接头，需要重新设计并合成合适的BLOCKER.
我们对不同平台的成品Blocker进行了测试，接下来让我们来看一下生工Blocker的效果吧。
图2 未加入封闭引物和加入封闭引物的捕获效率对比
相同的样本和探针，做4批平行实验，每个批次分别设置不加 EzyNGS 通用封闭引物和加 EzyNGS 通用封闭引物，各组的 On-Target Rate 求平均值，结果如图。
结果：EzyNGS 通用封闭引物可以增加捕获效率，封阻性能良好。
图3 不同批次封闭引物捕获效率
相同的样本和探针，做4批平行实验，各组的 On-Target Rate 求平均值，结果如图。
结果：EzyNGS 通用封闭引物各批次间批间差较小，性能稳定。
生工生物工程（上海）股份有限公司自2011年成立高通量测序部以来，逐步引进了Illumina，Life，DNBSEQ，PacBio、Nanopore、等二代/三代测序平台。建立了2000平米高标准实验室（通过了国家ISO认证）并搭建了50PB级存储及运算能力的服务器集群，能满足绝大多数科研客户的研究需要。同时，生工高通量测序团队建设也在不断完善中，目前有100余专职员工，其中高级技术人员以及高级生物信息工程师占比50%以上，10年来，通过生工高通量测序服务所发表的文章累计影响因子在10000分以上。
生工生物现可提供多种成品及定制Blocker，感兴趣的小伙伴欢迎来电与我们技术支持沟通交流，技术支持联系方式：021-3777 2413。
成品Blocker
定制Blocker
参考文献
[1] 周 健, 师永霞, 张 璐, 戴 俊, 黄吉城. 靶向二代测序研究进展 [J]. CHINA PORT SCIENCE AND TECHNOLOGY, 2024,6(4): 4-8.
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