2024年9月，优宁维联合Cytiva旗下的HyClone品牌开启细胞污染大作战，理论讲座+互动一对一答疑+细胞房诊断，旨在手把手面对面教会科研人呵护自己的细胞宝宝。小优之前也为大家整理了现场最常提问的十大问题《细胞污染大作战：经典十问抢先看！》，10月，优宁维产品经理和HyClone细胞培养专家继续出发，帮助大家解决细胞污染难题！没想到，这次细胞污染的大boss竟然是他？---支原体。今天小优为大家整理了现场诊断中关于支原体污染特征-去除-防控三大方面的细节问题，一起学习下吧~

10月细胞污染大作战日程表

Q1：PBMC分离刺激后4-5天，出现了长条状的细胞，是什么原因？

A1：1.细胞分化异常的原因之一是支原体，可以做一个支原体检测，确保没有污染出现；2.PBMC分化异常与过度激活有关系，如果确定无污染，同时会观察到细胞凋亡，可以判断是过度激活导致的分化异常，可以调整细胞因子的浓度；3.细胞因子的品牌质量可能会影响激活质量，可以尝试更换品牌。

Q2：细胞状态出现空泡，不贴壁，可能的原因有哪些？

A2：1.细胞污染：在细胞培养过程中，若出现细菌、支原体、黑胶虫等污染，会导致细胞状态明显变差，可能引发细胞产生空泡等异常现象所以首先先排除是否有细胞污染。支原体污染后可能会出现细胞不贴壁，聚团等情况。2.更换细胞使用的培养基或血清可能导致细胞不适应，从而产生空泡。3.传代或换液不及时：细胞长满后未及时传代或细胞长时间未换液，会导致培养过程中细胞代谢副产物的累积和营养物质的耗尽，可能诱导细胞自噬的发生，进而细胞出现空泡化。

Q3：实验室中一个细胞发生了支原体污染，会不会影响同实验室的其他细胞？

A3：会，支原体传播途径包括气溶胶和无机物等，可以通过空气传播，如果细胞房内有一个污染，其他细胞都会处于污染压力之下，需要定期做检测和支原体预防，确定污染后要做支原体清除，甚至实验室的大规模消杀。

细胞生长异常，如不贴壁、聚团、质膜粗糙，同时排除了细菌真菌一类的污染，考虑进行支原体检测；另外，因为支原体的传播途径很广泛，当实验室曾经发生过支原体污染，后续应当加强支原体的检测；新引进的细胞或准备长期保存的细胞，需通过支原体检测后再进行实验或冻存。

Q1：普通的抗生素可以杀灭支原体吗？

A1：普通抗生素抑制细菌细胞壁合成，支原体没有细胞壁结构，普通的抗生素对于支原体是没有抑制作用的。并且支原体耐低温，-20℃可存活一年，冷冻干燥的条件下会存活更久。

Q2：支原体可以通过加热灭活吗？

A2：支原体可以加热杀灭，但高温对细胞有不良影响，热处理前要进行预试验，另外可选用大环内酯、四环素类专门的支原体清除试剂进行去除。

Q3：支原体清除试剂和支原体预防试剂有什么区别？什么时候用？

A3：支原体清除试剂是专门用于杀灭和清除已经污染的细胞培养液中，目的是清除已有的支原体污染，可以抑制支原体蛋白质合成和DNA合成，一般需要处理一段时间。支原体预防试剂，主要用于细胞培养的日常维护中，或者在支原体清除后加入支原体预防试剂防止再次污染。

支原体的去除可以通过热处理（对细胞也有不良影响）、商品化的支原体清除试剂实现，清除完成后，需进行支原体的检测，确保清除完毕。

Q1：细胞间经常出现支原体污染，怎么防控？

A1：1.实验习惯要保持良好，包括个人穿戴、工作台操作、日常卫生；2.采用检测＋监测手段进行预防，新到细胞、重要实验、传代冻存前都要进行检测，每月1-2次常规抽查检测；3.使用支原体预防剂进行添加处理；4.发生误及时使用支原体清除剂处理，并转移其他细胞至安全的地方，直至细胞间完成彻底消杀；5.注意周围实验室的污染情况，避免到污染实验室走动。

Q2：神经元细胞原代分离出现支原体污染，如何防控？

A2：1.原代分离做好个人防护，尤其是口罩：2.使用单独的工作台进行原代分离处理；3.分离过程中使用的洗液和培养基添加双抗和支原体预防剂；4.细胞分离培养后进行支原体检测，如果有污染立即做支原体清除处理。

首先需要保持良好的实验习惯以及个人防护，其次可借助支原体预防试剂进行预防，并常常进行支原体全面检测+抽检进行监测。

细胞污染大作战依旧火热进行中，如果您也想拥有理论讲座+互动一对一答疑+细胞房诊断，扫描下方二维码联系我们吧，下一个“污染终结者”就是你！更多细胞污染问题，持续更新中~